離心分離的效果除了與離心機(jī)種類、離心方法、離心介質(zhì)及密度梯度等因素有關(guān)以外，實(shí)際操作時(shí)，主離心機(jī)轉(zhuǎn)速和離心時(shí)間的確定、離心介質(zhì)的PH值和溫度等條件也至關(guān)重要。

(一) 離心機(jī)的轉(zhuǎn)速

離心加速度的大小取決于轉(zhuǎn)子的轉(zhuǎn)速和顆粒的旋轉(zhuǎn)半徑。在說明離心條件時(shí)，往往也用相對(duì)離心力場來表示。實(shí)際工作中，離心力場的數(shù)據(jù)是指其平均值。即是指在離心溶液中點(diǎn)處顆粒所受的離心力場。

(二) 離心時(shí)間

離心時(shí)間依據(jù)離心方法的不同而有所差別。對(duì)于差速離心來說，是指某種顆粒完全沉降到離心管底的時(shí)間;對(duì)等密度梯度離心而言，離心時(shí)間是指顆粒完全到達(dá)等密度點(diǎn)的平衡時(shí)間;而密度梯度離心所需的時(shí)間則是指形成界限分明的區(qū)帶的時(shí)間。對(duì)于密度梯度離心和等密度梯度離心所需的區(qū)帶形成時(shí)間或平衡時(shí)間，影響因素很復(fù)雜，可通過試驗(yàn)后確定。

顆粒的沉降時(shí)間又稱澄清時(shí)間，是指顆粒從離心樣品液液面完全沉降到離心管底所需的時(shí)間。沉降時(shí)間決定于顆粒沉降速度和沉降距離。

(三) 溫度和PH值

為了防止分離物質(zhì)的凝集、變性和失活，除了在離心介質(zhì)的選擇方面加以注意外，還必須控制好溫度及介質(zhì)溶液的PH值等離心條件。離心溫度一般控制在4度左右，對(duì)于某些熱穩(wěn)定性較好的酶等，離心也可在室溫下進(jìn)行。但在超速或高速離心時(shí)，轉(zhuǎn)子高速旋轉(zhuǎn)會(huì)發(fā)熱從而引起溫度升高。故必須采用冷凍系統(tǒng)，使溫度保持在一定范圍內(nèi)。

離心介質(zhì)溶液的PH值應(yīng)該是處于酶穩(wěn)定的PH范圍內(nèi)，必要時(shí)可采用緩沖液。另外，過酸或過堿還可能引起轉(zhuǎn)子和離心機(jī)的其他部件的腐蝕，應(yīng)盡量避免。