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實驗時需要注意的5大細節

       實驗的成功率很重要,而要提高成功率,就必須注意細節。以下是做實驗需要注意的五大細節:
 
       一,記錄
       人的記憶力是有限的,在做實驗的時候,不可能記住做過的每一步。例如實驗記錄如果不及時寫,第二天就會忘記很多,一周之后就完全忘記了。所以做實驗一定要做好實驗記錄。記錄一要及時,否則就會忘記,最好是隨時記錄。二要詳細,因為一個很小的細節可能就是實驗失敗或者成功的原因,如果沒有記下這個細節,實驗出問題了就難以找到原因。例如,做實驗用的試劑是哪一瓶,什么時候配的(尤其是容易失效的試劑),如果是用PBST配的5%BSA,加了0.02%的Sodium Azide抑制微生物生長,就應該記錄為5%BSA.PBST.N3Na,而不是5%BSA。三要整潔,如果過于潦草,看起來很不方便,需要找相關信息的時候就難以找到。配好的試劑做好標簽也是一種記錄,標簽一定要詳細:包括試劑名稱、配置日期、配置者及其它必要信息。在配試劑的時候,為了防止忘記貼標簽的情況,應該先貼標簽,再加試劑。電子記錄有易于檢索的優點,對于某些重要信息,可以記錄到電子文檔(例如word文檔)里面。
 
       二,核查
       很多時候,我實驗失敗的原因是沒有仔細核查,例如沒有核查果蠅的表型,沒有仔細檢查試劑的標簽,沒有核查離心機的轉速,沒有檢查heat block的溫度等等。每一個小錯誤都可能導致實驗失敗,所以一定要養成仔細核查的習慣。具體來說,在加試劑的時候,一定要仔細核查標簽(包括試劑名稱、配置日期),是否有沉淀,顏色是否改變等;使用儀器的時候,要核查設置,例如溫度、轉速、時間設置等;電泳的時候,要核查是否有氣泡冒出;使用實驗動物的時候,要核查表型等。
 
       三,分裝
       諺語說:不要把所有雞蛋都放到同一個籃子里。同樣,在做實驗的時候,有時也不要把所有試劑都放到同一個容器里。分裝有很多好處。第一,保險??梢苑乐挂驗槲廴尽⒆冑|等原因損失全部試劑或者樣品。第二,容易混勻。結冰的試劑需要全部溶解然后vortex才可以混勻,如果很大體積,有時會等不及全部溶解就開始加樣,會導致濃度不均。一般溶液都是先溶解溶質濃度高的,就像是結冰的汽水一邊融化一邊喝,一開始很甜,最后幾乎沒有甜味了,是因為糖份的存在會降低熔點,含糖量高的先溶解了。分裝后,每一管溶液量小,解凍時容易全部溶解。注意在分裝的時候一定要全部溶解并充分混勻。第三,延長保質期。很多試劑都要低溫保存。如果不分裝,每次使用的時候都全部受熱一次,變質就會很快。分裝之后,每次使用只有少量試劑受熱,其它的還可以繼續保持于低溫,可以延長使用壽命??贵w、體積較大的酶、熱不穩定的其它試劑等最好分裝保存于-20度或者更低的溫度。
 
       四,混勻
       實驗對很多試劑的用量都有明確要求。要保證實驗的成功和可重復性,必須保證試劑用量一致。用量等于體積乘以濃度,如果溶液不混勻的話,濃度就會不同,即使加樣體積一樣,實際的量也可能不一樣。所以,一定要保證試劑是充分混勻。結冰的試劑,必須完全溶解才可以使用。容易沉淀的試劑,使用之前必須充分vortex后再快速離心一下才能使用。
 
       五,備份
       在《At the bench》一書里,作者說如果實驗室發生起火等危急情況,首先應該搶救的不是試劑,而是實驗記錄。因為有了實驗記錄才可以完成論文。其實,為了防止實驗記錄丟失的情況,可以把實驗記錄掃描為PDF文檔以備份。同時,對于重要的研究數據,最好整理成電子文檔例如excel或word文檔,并且養成對自己的電腦文件定期備份的習慣。此外,質粒、轉化后的細菌也需要備份。最好備份兩份以降低丟失的概率。
 
       六,順序
       有時候需要給很多試管加不同的試劑。這么多試管和試劑,一不小心,就會忘記哪一管或者哪一樣試劑加了沒有。即使是只有兩三個試管,我有時候加了一個樣品,忽然就忘記是加了哪一管了。如果是按字母或者數字順序加樣的話,在這種情況下,就會清楚是加了哪一管。
       具體來說,給試管加樣的時候,按照試管的字母順序,數字順序排列。例如做同一個質粒的酶切,用了四種酶,分別是XbaI,KpnI,BamHI,BsteII,就按照從左至右分別為BamHI,BsteII,KpnI, XbaI的順序排列。把要加的試劑寫在紙上,按照從上至下,從左至右的順序加樣。對于同一個試劑,加一管,就把試管往左、右或者上、下移動一格。電泳時,不同的泳道順序為marker、control、實驗組。如果有多個marker或者control,也按照字母或者順序排列。收集樣品時,按照先時間順序,后字母、數字順序排列樣品。

 


標簽:  實驗室要求 芯片實驗室
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