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PCR 技術的基本原理

       PCR — 聚合酶鏈式反應
       優點:方法操作簡單,反應快速敏捷,結果可靠
       原理:與細胞內發生的DNA復制過程十分相似。

       是在模板、引物和4種dNTP(包含A、T、C、G四種堿基的脫氧核苷酸)存在條件下,依賴于DNA聚合酶體外擴增目的DNA的反應。
 
       模板:是指包含待擴增片段(目的片段)的一段DNA,可以是細菌和病毒的基因組DNA,細菌質粒DNA,也可以是病毒RNA經體外逆轉錄后形成的cDNA。

       引物:是指與目的片段兩翼互補的一對單鏈DNA片段,一般由17-30個寡核苷酸組成。

       DNA聚合酶:耐熱。商品化名稱為Taq 酶

       PCR反應的3個步驟
       變 性(denaturation): 通過加熱使DNA雙鏈解開,成為單鏈DNA的過程
       退 火(annealing):反應混合液冷卻至某一合適的溫度,兩個引物分別與兩條單鏈模板的互補區域結合的過程  
       延 伸(elongation):反應溫度再次升高,在DNA 聚合酶的作用下、 Mg2+存在的條件下,4種dNTP從引物的3’端開始參入,引物沿5’-3’方向延伸,合成出新生的DNA互補鏈。

 

       摘自本公司論壇——芯片上的實驗室:http://www.pmmachip.com


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